色谱填充柱是色谱分析中的重要部件，其测定步骤和使用注意事项对于保证分析结果的准确性和可靠性至关重要。
色谱填充柱的使用注意事项：
1.避免反冲
-一般情况下，色谱柱不能反冲，除非生产者明确指出可以这样做。反冲会迅速降低柱效。
2.流动相的选择与控制
-使用适宜的流动相，特别是要注意pH范围，以避免固定相被破坏。例如，以硅胶为基质的填料只能在pH=2～9范围内使用。
-有时可以在进样器前面连接一预柱，使流动相在进入分析柱之前预先被“饱和”，从而保护分析柱不受损害。
3.定期清洗与保养
-经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右。
-如果发现压力升高或柱效下降，可能是由于烧结滤片被堵塞或柱头被污染等原因造成的，应及时采取措施进行处理，如更换滤片或清洗柱头等。
4.防止缓冲溶液残留
-绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
5.注意柱效变化
-新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时可补加填料使柱效恢复。同时，如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大，需要小心处理。
6.采用保护柱
-在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱(5～30mm)，可以起到保护、延长柱寿命的作用。虽然采用保护柱会损失一定的柱效，但这通常是值得的。
7.操作规范
-在整个实验过程中，应严格遵守操作规程，避免剧烈震动和碰撞色谱柱，以免影响其性能和寿命。
8.记录与监控
-详细记录每次使用的参数(如流动相组成、流速、温度等)以及观察到的现象(如压力变化、基线稳定性等)，以便及时发现问题并采取相应措施。
